一、原理

氟苯尼考（Florfenicol）ELISA檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中氟苯尼考的殘留量。

二、適用范圍

定量檢測豬尿樣品中氟苯尼考的殘留。

三、氟苯尼考（Florfenicol）ELISA檢測試劑盒特點及技術(shù)指標

* 檢 測 時 間 ： 50 min

試劑盒靈敏度： 1 ppb(µg/kg)

* 試劑盒檢測純陰性樣本的背景值＜1ppb

試劑盒檢測樣本的靈敏度和準確度：

試劑盒特異性：

四、所需材料

儀器：微孔板酶標儀450 nm/630 nm、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：單道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

試劑：去離子水

五、 試劑盒組成

*注：5個標準品濃度為：0 ppb, 1 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27 ppb，A、B各1 mL，C、D、E各0.5 mL，直接使用。

六、溶液配制

配液1: 洗滌工作液

   用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進行稀釋，用于酶標板的洗滌，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個月，用前一天取出回溫。

配液2:  1×氟苯尼考樣品稀釋液     

   用去離子水將2×氟苯尼考樣品稀釋液按1:1體積比進行稀釋，用于樣本的稀釋，配好后在4℃環(huán)境可保存一個月，用前一天取出回溫。

七、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知：

① 處理完的樣品應及時進行下步檢測，實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

② 樣本數(shù)目超過8個時推薦使用排槍加樣。

豬尿（稀釋倍數(shù)：20）

豬尿需要用1×氟苯尼考樣品稀釋液稀釋至20倍，取50 μL用于分析，若渾濁需要先離心取上層分析。

八、 酶標免疫測定程序

• 將所有所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，待其*回升至室溫后方可使用，根據(jù)體積大小不同取出回溫的時間從1小時~2小時。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
•  按標準品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
•  加標準品/樣品、抗體：加標準品/樣品50µL 到對應的微孔中，加入氟苯尼考抗體50µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應20min。
•  洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，加入洗滌工作液300 µL/孔，每次靜置20s，甩去孔內(nèi)液體，重復洗滌3次，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
• 加酶標物：加入氟苯尼考酶標物100 µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光孵育20 min。
• 甩干孔內(nèi)液體，重復洗板3次，后一次用吸水紙拍干。
• 顯色：加入底物液A液50 µL/孔，再加底物液B液50 µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應10min。
• 測定：加入終止液50µL/孔，用酶標儀立即  測定450/630nm處的吸光度值。

九、 結(jié)果判定

以標準品百分吸光率為縱坐標，以氟苯尼考標準品濃度（ppb）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考實際濃度。（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件，以便進行大量樣本的分析計算。）

十、 注意事項

① 根據(jù)體積大小不同取出回溫的時間從1小時~3小時，體積15毫升以上的優(yōu)先從冷藏環(huán)境取出 回溫。

②  洗板拍干后應立即進行下一步操作。

③ 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

④不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號的試劑。

⑤ 0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色    時間為10min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到15-20min，反之則減短反應時間。

⑦ 底物液B液長期使用變?yōu)闇\藍色時，請放心使用，不影響檢測結(jié)果。

十一、貯藏條件及保存期

    貯藏條件： 2～8℃

保 質(zhì) 期： 12個月